發(fā)文機(jī)關(guān)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局藥品評(píng)審中心
發(fā)文日期2024年02月08日
時(shí)效性現(xiàn)行有效
施行日期2024年02月08日
效力級(jí)別部門(mén)規(guī)范性文件
一、 前言
抗體偶聯(lián)藥物（Antibody-Drug Conjugate，ADC）是由靶向特異性抗原的抗體或抗體片段與有效載荷（payload）通過(guò)連接子（linker）偶聯(lián)而成的一類(lèi)創(chuàng)新型抗體藥物。與傳統(tǒng)抗體藥物相比，ADC 產(chǎn)品兼具傳統(tǒng)小分子藥物強(qiáng)效作用及抗體藥物的靶向性，以降低全身毒性并更有選擇性地將有效載荷遞送至腫瘤細(xì)胞、腫瘤微環(huán)境或其他靶細(xì)胞中。近年來(lái)，隨著抗體、有效載荷、連接子、偶聯(lián)技術(shù)和分析技術(shù)等的快速發(fā)展，使 ADC 產(chǎn)品具有更高的均一性、穩(wěn)定性和治療指數(shù)，極大地促進(jìn)了ADC產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)熱潮。
考慮到 ADC 產(chǎn)品的復(fù)雜性和特殊性，為了規(guī)范和指導(dǎo)ADC 產(chǎn)品的研發(fā)，制定本指導(dǎo)原則。本指導(dǎo)原則基于當(dāng)前的科學(xué)認(rèn)知，主要針對(duì) ADC 產(chǎn)品申報(bào)上市階段的藥學(xué)研究
提出建議性技術(shù)要求，旨在為研發(fā)單位提供技術(shù)指導(dǎo)。申請(qǐng)人亦可基于產(chǎn)品研發(fā)的實(shí)際情況，采用其他等同或更有效的技術(shù)和方法開(kāi)展研究，但是應(yīng)符合藥物研發(fā)的規(guī)律，并提供證明其科學(xué)性和適用性的資料。隨著技術(shù)的發(fā)展、認(rèn)知的深入和經(jīng)驗(yàn)的積累，本指導(dǎo)原則的相關(guān)內(nèi)容將逐步完善和更新。
二、 適用范圍
本指導(dǎo)原則主要適用于由抗體/抗體片段和有效載荷（如小分子細(xì)胞毒藥物）通過(guò)連接子偶聯(lián)而成的 ADC 產(chǎn)品。其他偶聯(lián)藥物如抗體偶聯(lián)核素藥物、多肽偶聯(lián)藥物、抗體寡核苷酸偶聯(lián)藥物等也可參考本指導(dǎo)原則。由于 ADC 產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)復(fù)雜多樣，對(duì)于已有成熟的技術(shù)指導(dǎo)原則覆蓋的組成部分（如小分子部分、抗體部分等），本指導(dǎo)原則將不再贅述，可參考相應(yīng)的技術(shù)要求。
三、 一般原則
ADC 產(chǎn)品的藥學(xué)研究應(yīng)符合《中華人民共和國(guó)藥品管理法》、《藥品注冊(cè)管理辦法》、《中華人民共和國(guó)藥典》（以下簡(jiǎn)稱(chēng)《中國(guó)藥典》）的相關(guān)要求，臨床試驗(yàn)用樣品的生產(chǎn)應(yīng)符合現(xiàn)行版《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》臨床試驗(yàn)用藥品（試行）附錄的相關(guān)要求。
1. 一般要求
產(chǎn)品設(shè)計(jì)方面，ADC 產(chǎn)品雖然通常被認(rèn)為是大分子藥物，但其具有大分子和小分子的雙重屬性，靶抗原、抗體、有效載荷、連接子和偶聯(lián)方式的選擇均是影響 ADC 產(chǎn)品安全性和有效性的關(guān)鍵因素。因此，ADC 產(chǎn)品的安全性和有效性有賴(lài)于對(duì)上述組分的慎重選擇、多方面優(yōu)化以及合理的組合，需從靶向性、在體內(nèi)循環(huán)中的穩(wěn)定性以及生物學(xué)活性等多個(gè)方面進(jìn)行綜合考量。 生產(chǎn)工藝方面，ADC 產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝通常涉及裸抗生產(chǎn)、小分子生產(chǎn)、ADC原液生產(chǎn)和 ADC制劑生產(chǎn)等多個(gè)生產(chǎn)環(huán)節(jié)。產(chǎn)品開(kāi)發(fā)過(guò)程中，可基于“質(zhì)量源于設(shè)計(jì)”和“風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估”等理念，開(kāi)展工藝設(shè)計(jì)和工藝開(kāi)發(fā)工作。需特別注意應(yīng)將各個(gè)組分（裸抗、小分子、ADC 原液和 ADC制劑）作為一個(gè)整體，綜合考慮整體生產(chǎn)工藝的雜質(zhì)、病毒安全性等風(fēng)險(xiǎn)及控制。
處方開(kāi)發(fā)方面，與抗體藥物相比，ADC 分子可能具有疏水性較高、表面電荷不規(guī)則、構(gòu)象穩(wěn)定性差、異質(zhì)性高等特點(diǎn)，給處方開(kāi)發(fā)帶來(lái)了更多的復(fù)雜性和不穩(wěn)定因素。此外，裸抗、小分子和 ADC 分子均具有不同的生物物理性質(zhì)，偶聯(lián)過(guò)程也可能影響蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性（如導(dǎo)致構(gòu)象變化、聚集和降解等），因此，制劑處方開(kāi)發(fā)需找到合適的配方，平衡裸抗、小分子和偶聯(lián)的穩(wěn)定性，密切關(guān)注制劑中蛋白的聚集和顆粒形成、有效載荷的脫落等情況。
質(zhì)量研究和控制方面，ADC 產(chǎn)品的分子結(jié)構(gòu)、作用機(jī)制和質(zhì)量研究與控制策略均具有其獨(dú)特性，不同產(chǎn)品因設(shè)計(jì)理念和生產(chǎn)工藝不同，質(zhì)量研究和質(zhì)量控制方面也存在其特殊性，需視具體情況具體分析。由于 ADC 產(chǎn)品結(jié)構(gòu)復(fù)雜、異質(zhì)性強(qiáng)、包含多種產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)和工藝相關(guān)雜質(zhì)，除了抗體藥物具有的關(guān)鍵質(zhì)量屬性外，還會(huì)引入與小分子、偶聯(lián)工藝等相關(guān)的其他關(guān)鍵質(zhì)量屬性，需采用適宜的技術(shù)手段或?qū)⒍喾N分析手段相結(jié)合的策略，將結(jié)構(gòu)特性、純度和雜質(zhì)、異質(zhì)性、生物學(xué)活性、有效載荷分布等關(guān)鍵質(zhì)量屬性進(jìn)行充分表征。
2. 不同研發(fā)階段的考慮
ADC 產(chǎn)品作為創(chuàng)新型抗體藥物，研發(fā)和生產(chǎn)需遵循藥物研發(fā)的一般規(guī)律，在保證臨床基本安全性的前提下逐步完善、持續(xù)優(yōu)化。根據(jù)藥物研發(fā)生命周期的規(guī)律，在不同研發(fā)階段以及上市后的過(guò)程中，采用基于科學(xué)和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的開(kāi)發(fā)策略。
臨床試驗(yàn)申報(bào)階段，應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注影響臨床安全性的因素，以保障臨床受試者的安全。例如，外源因子的控制，應(yīng)從起始物料（如細(xì)胞基質(zhì)、其他生產(chǎn)用原材料等）、生產(chǎn)過(guò)程控制、放行檢測(cè)等綜合考慮，避免外源因子的污染；臨床樣品制備工藝應(yīng)具備初步的穩(wěn)健性，建立初步的中間體控制項(xiàng)目和標(biāo)準(zhǔn)，重點(diǎn)關(guān)注臨床樣品生產(chǎn)過(guò)程對(duì)病毒安全、微生物安全、無(wú)菌保障等方面的控制；采用代表性樣品開(kāi)展質(zhì)量研究，安全性和活性等分析方法的開(kāi)發(fā)和確認(rèn)，結(jié)合平臺(tái)經(jīng)驗(yàn)、產(chǎn)品知識(shí)以及多批次檢測(cè)數(shù)據(jù)擬定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，基于產(chǎn)品特點(diǎn)和生產(chǎn)工藝對(duì)雜質(zhì)進(jìn)行合理控制；開(kāi)展初步的穩(wěn)定性研究，研究結(jié)果應(yīng)能支持臨床試驗(yàn)的開(kāi)展；結(jié)合產(chǎn)品特點(diǎn)選擇合適的容器密封系統(tǒng)，基于穩(wěn)定性考察數(shù)據(jù)和供應(yīng)商的可提取物數(shù)據(jù)等對(duì)相容性進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。非臨床研究是評(píng)估產(chǎn)品在人體使用安全性的重要參考依據(jù)，需特別關(guān)注臨床試驗(yàn)用樣品與非臨床研究用樣品在生產(chǎn)工藝和質(zhì)量方面的對(duì)比或橋接分析，原則上，臨床試驗(yàn)用樣品的質(zhì)量應(yīng)不低于非臨床研究用樣品的質(zhì)量或不低于經(jīng)過(guò)研究證明具有人體安全性的臨床試驗(yàn)樣品的質(zhì)量。
臨床試驗(yàn)期間，基于工藝開(kāi)發(fā)和對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量屬性的理解，需逐步確認(rèn)關(guān)鍵工藝步驟和工藝參數(shù)、生產(chǎn)過(guò)程中的控制項(xiàng)目和關(guān)鍵質(zhì)量屬性等，建立穩(wěn)定的生產(chǎn)工藝和完善的質(zhì)量控制體系。研發(fā)期間，生產(chǎn)用原材料、生產(chǎn)工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等可能會(huì)隨著工藝開(kāi)發(fā)或優(yōu)化發(fā)生變更。ADC 產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)、生產(chǎn)工藝和供應(yīng)鏈等的復(fù)雜性對(duì)評(píng)估變更的潛在影響提出了額外的挑戰(zhàn)，變更計(jì)劃的評(píng)估和實(shí)施應(yīng)更為謹(jǐn)慎。各類(lèi)變更方案的實(shí)施需建立在與研發(fā)階段相適應(yīng)的可比性研究基礎(chǔ)上，可比性研究應(yīng)基于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估原則并參考 ICH Q5E 等相關(guān)指導(dǎo)原則的要求進(jìn)行，采用足夠精密且靈敏的分析方法合理評(píng)估變更對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的影響，尤其應(yīng)關(guān)注上游工藝變更造成的裸抗、小分子的質(zhì)量屬性的差異是否會(huì)對(duì)后續(xù)偶聯(lián)工藝或 ADC 關(guān)鍵質(zhì)量屬性產(chǎn)生不良影響。
上市申報(bào)階段，經(jīng)過(guò)工藝開(kāi)發(fā)和系統(tǒng)完整的工藝驗(yàn)證，確定關(guān)鍵工藝步驟和關(guān)鍵工藝參數(shù)，并對(duì)關(guān)鍵質(zhì)量屬性進(jìn)行控制，以確保商業(yè)化生產(chǎn)工藝能持續(xù)、穩(wěn)定地生產(chǎn)出符合目標(biāo)質(zhì)量的產(chǎn)品。藥學(xué)研究數(shù)據(jù)應(yīng)能支持產(chǎn)品的安全、有效和質(zhì)量可控性。同時(shí)，制定上市后生產(chǎn)工藝持續(xù)確認(rèn)和優(yōu)化的工作方案，以持續(xù)地保證產(chǎn)品質(zhì)量。
四、 風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與控制
ADC 產(chǎn)品是大分子和小分子結(jié)合的創(chuàng)新型抗體藥物，從產(chǎn)品的設(shè)計(jì)、生產(chǎn)工藝和處方開(kāi)發(fā)、質(zhì)量研究和控制、穩(wěn)定性研究等方面均面臨諸多挑戰(zhàn)。產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)從起始物料、工藝開(kāi)發(fā)到質(zhì)量控制等都涉及化學(xué)和生物學(xué)等多學(xué)科參與，其分子結(jié)構(gòu)和生產(chǎn)過(guò)程復(fù)雜多樣，產(chǎn)品異質(zhì)性高，且不同的 ADC 產(chǎn)品也可能呈現(xiàn)出較大的差異，加上新的抗體形式、有效載荷、連接子以及新的偶聯(lián)策略也在不斷涌現(xiàn)，使得每個(gè) ADC 產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝和控制策略都具有個(gè)性化的特點(diǎn)。此外，ADC 產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝包含多個(gè)生產(chǎn)環(huán)節(jié)，存在較高的變更復(fù)雜性。因此，需基于產(chǎn)品和工藝的特點(diǎn)，參考 ICH Q8、ICH Q9、ICH Q11等相關(guān)指導(dǎo)原則的質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理理念，科學(xué)利用風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估工具，從分子設(shè)計(jì)、生產(chǎn)工藝、質(zhì)量控制和穩(wěn)定性等多因素進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果，結(jié)合對(duì)產(chǎn)品和工藝的理解制定相應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)控制策略。風(fēng)險(xiǎn)控制策略的修訂應(yīng)貫穿于產(chǎn)品的全生命周期，隨著新知識(shí)、生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)的積累和對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量屬性理解的深入不斷更新。
五、 生產(chǎn)用物料
生產(chǎn)用物料主要指 ADC 產(chǎn)品生產(chǎn)過(guò)程中使用的所有物料，包括起始物料、生產(chǎn)過(guò)程中使用或添加的物料（如培養(yǎng)基及其添加成分、純化試劑、偶聯(lián)試劑、偶聯(lián)酶等）、輔料以及生產(chǎn)用耗材（如培養(yǎng)袋、儲(chǔ)液袋、移液管路、濾膜等）等。生產(chǎn)用物料與產(chǎn)品的質(zhì)量、安全性和有效性密切相關(guān)，應(yīng)建立良好、規(guī)范的質(zhì)量管理體系，并參照《中國(guó)藥典》等相關(guān)要求基于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估原則進(jìn)行控制。
生產(chǎn)過(guò)程中使用的細(xì)胞基質(zhì)應(yīng)符合《中國(guó)藥典》通則“生物制品生產(chǎn)檢定用菌毒種管理及質(zhì)量控制”和“生物制品生產(chǎn)檢定用動(dòng)物細(xì)胞基質(zhì)制備及質(zhì)量控制”的相關(guān)要求；使用的其他生產(chǎn)用物料應(yīng)符合《中國(guó)藥典》通則“生物制品生產(chǎn)用原材料及輔料質(zhì)量控制”和ICH Q11的相關(guān)要求。對(duì)于化學(xué)結(jié)構(gòu)和生產(chǎn)工藝較為復(fù)雜的起始物料，應(yīng)結(jié)合起始物料的生產(chǎn)工藝，對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行全面的分析和合理的控制。
生產(chǎn)過(guò)程中使用的耗材和容器，如一次性生物反應(yīng)器、超濾膜包、過(guò)濾器、管路等，應(yīng)具有穩(wěn)定的物理和化學(xué)特性，耗材與直接接觸的溶液、中間產(chǎn)物等有良好的相容性。
基于耗材的材質(zhì)、使用階段、供應(yīng)商檢測(cè)報(bào)告等開(kāi)展風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估或相應(yīng)的相容性研究。此外，ADC 生產(chǎn)過(guò)程中如果需要添加一定比例的有機(jī)溶劑，則生產(chǎn)過(guò)程中直接接觸的材料（如一次性反應(yīng)袋、超濾膜包、生產(chǎn)設(shè)備等）應(yīng)能夠耐受有機(jī)溶劑且浸出物需符合相關(guān)要求，同時(shí)需關(guān)注浸出物對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的影響。對(duì)于疏水性較高的 ADC 產(chǎn)品，還需關(guān)注 ADC 分子與除菌濾膜的非特異性結(jié)合，選擇合適的濾膜。
六、 生產(chǎn)工藝
（一）生產(chǎn)工藝開(kāi)發(fā)
ADC 產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝通常包括裸抗生產(chǎn)、小分子生產(chǎn)、ADC 原液生產(chǎn)和制劑生產(chǎn)等多個(gè)生產(chǎn)環(huán)節(jié)。應(yīng)遵循藥物生產(chǎn)工藝開(kāi)發(fā)的一般規(guī)律，基于對(duì)目標(biāo)產(chǎn)品質(zhì)量概況（Quality Target Product Profile，QTPP）的理解，結(jié)合生產(chǎn)工藝與質(zhì)量之間的相關(guān)性，逐步完善工藝，完成從實(shí)驗(yàn)室到商業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)的開(kāi)發(fā)過(guò)程，逐步確定關(guān)鍵質(zhì)量屬性、工藝步驟和關(guān)鍵工藝參數(shù)?；陲L(fēng)險(xiǎn)分析，建立全過(guò)程的控制策略，合理設(shè)定生產(chǎn)過(guò)程中的控制，尤其是生產(chǎn)過(guò)程中外源因子污染和關(guān)鍵中間產(chǎn)物的質(zhì)量控制。產(chǎn)品生命周期中，生產(chǎn)工藝應(yīng)隨著工藝技術(shù)的進(jìn)步和對(duì)產(chǎn)品理解的深入不斷優(yōu)化。工藝優(yōu)化應(yīng)基于變更類(lèi)型和開(kāi)發(fā)階段，充分評(píng)估變更對(duì)產(chǎn)品安全性和有效性的影響，參考相關(guān)指導(dǎo)原則針對(duì)工藝優(yōu)化開(kāi)展相應(yīng)的可比性研究，以保證產(chǎn)品質(zhì)量。
對(duì)于光敏感性的小分子，在特定光照波段或高強(qiáng)度照射下會(huì)發(fā)生化學(xué)結(jié)構(gòu)的變化，而這種化學(xué)結(jié)構(gòu)變化可能會(huì)影響 ADC 產(chǎn)品的質(zhì)量屬性（如生物學(xué)活性等）。因此，需要在生產(chǎn)過(guò)程中采取適當(dāng)?shù)拇胧ㄈ缟a(chǎn)環(huán)境采用黃光替代白光，中間體儲(chǔ)存容器避光等），并在制劑灌裝過(guò)程以及儲(chǔ)存條件和包裝容器的選擇上開(kāi)展系統(tǒng)性研究。
1. 小分子部分
小分子（包括半合成來(lái)源）的生產(chǎn)工藝開(kāi)發(fā)，應(yīng)參照化學(xué)原料藥的要求開(kāi)展，可參考《化學(xué)藥物原料藥制備和結(jié)構(gòu)確證研究的技術(shù)指導(dǎo)原則》、“人用重組 DNA 蛋白制品總論”、ICH等相關(guān)指導(dǎo)原則。
根據(jù) ADC 修飾和偶聯(lián)反應(yīng)的化學(xué)特性，合理選擇和設(shè)計(jì)連接子、有效載荷和 ADC 分子的合成/工藝路線，參照ICH Q11及其問(wèn)答（Q&A）合理選擇化學(xué)合成用起始物料，并制定小分子的合成工藝和質(zhì)量控制策略。對(duì)于含有多手性中心的連接子和有效載荷，應(yīng)關(guān)注手性中心是否會(huì)影響ADC 產(chǎn)品的生物學(xué)活性，對(duì)手性雜質(zhì)進(jìn)行合理控制。小分子的關(guān)鍵質(zhì)量屬性應(yīng)從其對(duì) ADC 藥物偶聯(lián)工藝和最終產(chǎn)品的安全性、有效性等方面的影響，通過(guò)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的方式進(jìn)行確認(rèn)。
2. 裸抗部分
裸抗的生產(chǎn)工藝開(kāi)發(fā)應(yīng)參考《中國(guó)藥典》、《人用單克隆抗體質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則》，以及 ICH、WHO 等國(guó)際通用有關(guān)技術(shù)要求開(kāi)展研究。裸抗與常規(guī)抗體藥物生產(chǎn)工藝類(lèi)似，但是部分基因工程改造過(guò)的用于定點(diǎn)偶聯(lián)的裸抗生產(chǎn)工藝可能會(huì)由于其修飾基團(tuán)的特點(diǎn)而有所不同。因此，裸抗除了需關(guān)注常規(guī)抗體生產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)外，還需要從ADC產(chǎn)品分子的設(shè)計(jì)和生產(chǎn)的整個(gè)過(guò)程關(guān)注其對(duì) ADC原液生產(chǎn)過(guò)程的影響，以及對(duì)最終 ADC 產(chǎn)品質(zhì)量的影響。如聚體種類(lèi)和含量的控制需要考慮到 ADC 原液生產(chǎn)過(guò)程中聚體的變化；而對(duì)于賴(lài)氨酸介導(dǎo)的偶聯(lián)技術(shù)的 ADC 藥物，需要考慮裸抗的N末端賴(lài)氨酸殘基水平以及裸抗溶液中的氨基酸成分；對(duì)于半胱氨酸介導(dǎo)的偶聯(lián)技術(shù)的 ADC 藥物，需要關(guān)注裸抗的半胱氨酸相關(guān)變異體（如二硫鍵、三硫鍵、游離巰基等）水平。在裸抗（特別是雙特異抗體或多特異抗體）的工藝開(kāi)發(fā)和控制中，還需關(guān)注產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)（如二硫鍵錯(cuò)配雜質(zhì)）對(duì)最終 ADC 產(chǎn)品的安全性和有效性等方面的影響。對(duì)于裸抗溶液組分的開(kāi)發(fā)，除了需要確保裸抗本身的穩(wěn)定性之外，還需要考慮與后續(xù)偶聯(lián)工藝的兼容性，避免對(duì)后續(xù) ADC 生產(chǎn)（包括偶聯(lián)和制劑等）造成影響；若對(duì)后續(xù) ADC 生產(chǎn)有影響，需在偶聯(lián)前進(jìn)行緩沖液置換等操作，以減少對(duì)后續(xù)工藝的影響。
3. ADC原液
ADC原液生產(chǎn)工藝的開(kāi)發(fā)，可基于ICH Q8質(zhì)量源于設(shè)計(jì)的理念，進(jìn)行工藝設(shè)計(jì)和開(kāi)發(fā)工作。ADC 原液的生產(chǎn)工藝通常包括抗體修飾（如適用）、偶聯(lián)反應(yīng)和 ADC 純化等步驟。
抗體修飾部分根據(jù)采用的偶聯(lián)技術(shù)不同可能各不相同，抗體修飾的主要目的是在抗體上引入可供反應(yīng)的活性化學(xué)基團(tuán)，如通過(guò)還原劑打開(kāi)抗體二硫鍵產(chǎn)生活性自由巰基；也可通過(guò)生物酶對(duì)糖鏈進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，在糖鏈上引入活性反應(yīng)基團(tuán)等?？贵w修飾是決定 ADC 藥物載藥量和載藥分布的關(guān)鍵步驟，因此需要根據(jù)偶聯(lián)技術(shù)和修飾反應(yīng)特點(diǎn)，開(kāi)發(fā)合適的生產(chǎn)工藝，選擇和設(shè)定合理的中控策略。如修飾后裸抗需要純化的，應(yīng)引入合理的純化工藝；如在修飾過(guò)程中的試劑有引入外源病毒因子風(fēng)險(xiǎn)的，其純化工藝應(yīng)充分考慮外源病毒因子的去除，并參考 ICH Q5A 開(kāi)展病毒清除研究；如修飾后裸抗按中間體管理的，還應(yīng)制定合理的中間體質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)并開(kāi)展相應(yīng)的穩(wěn)定性研究，設(shè)定有效期等。
偶聯(lián)反應(yīng)相對(duì)于抗體修飾步驟而言，有多個(gè)比較相似的技術(shù)平臺(tái)。通常是利用快速的化學(xué)反應(yīng)或酶促反應(yīng)將小分子偶聯(lián)在修飾后的裸抗的活性位點(diǎn)上，或者利用化學(xué)反應(yīng)和酶促反應(yīng)的特異性直接將小分子偶聯(lián)至裸抗的特定位點(diǎn)上。在此過(guò)程中，必須考慮裸抗、連接子和有效載荷的不同物理和化學(xué)特性。如抗體在緩沖水溶液中更穩(wěn)定，而大多數(shù)小分子是疏水性的，因此通常會(huì)使用有機(jī)溶劑（如二甲基亞砜、二甲基乙酰胺、乙腈等）輔助提高小分子在水溶液中的溶解性，以提高偶聯(lián)反應(yīng)的效率，但有機(jī)溶劑的使用可能會(huì)導(dǎo)致裸抗的不穩(wěn)定。偶聯(lián)反應(yīng)需特別關(guān)注有機(jī)溶劑的選擇，小分子的投料比例、pH、溫度、裸抗?jié)舛鹊葏?shù)，控制聚體和非特異性偶聯(lián)的產(chǎn)生。考慮到 ADC 產(chǎn)品的高異質(zhì)性，建議關(guān)注偶聯(lián)工藝中抗體二硫鍵的還原位點(diǎn)和還原比例（如適用）、偶聯(lián)位點(diǎn)和結(jié)合數(shù)量的控制、有效載荷的分布、雜質(zhì)的偶聯(lián)情況等，從而確定合理的工藝參數(shù)。定點(diǎn)偶聯(lián)應(yīng)基于其定點(diǎn)偶聯(lián)原理，關(guān)注可能的非目標(biāo)位點(diǎn)偶聯(lián)發(fā)生概率及其他副反應(yīng)情況。如涉及到酶催化的反應(yīng)，還應(yīng)關(guān)注酶催化劑引入的安全性風(fēng)險(xiǎn)及其在ADC 原液中的殘留風(fēng)險(xiǎn)。若偶聯(lián)反應(yīng)中出現(xiàn)過(guò)量投料的操作，需開(kāi)展相應(yīng)的工藝研究，并結(jié)合下游工藝進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。若涉及多步偶聯(lián)反應(yīng)，需關(guān)注影響各步偶聯(lián)效率的參數(shù)（如投料比等），避免因偶聯(lián)效率不高或投料不足產(chǎn)生高比例空載連接子偶聯(lián)抗體、藥物抗體偶聯(lián)比（Drug-to-Antibody Ratio, DAR）偏低或游離有效載荷殘留偏高等問(wèn)題。
對(duì)于雙載荷 ADC 產(chǎn)品，偶聯(lián)工藝更為復(fù)雜，還需在偶聯(lián)過(guò)程中關(guān)注兩種載荷的 DAR 值是否達(dá)到目標(biāo)值，同時(shí)還應(yīng)關(guān)注目標(biāo)位點(diǎn)和非目標(biāo)位點(diǎn)的偶聯(lián)情況；若涉及過(guò)量投料，還需關(guān)注對(duì)藥物載量分布和兩種載荷DAR值控制的影響。
純化的主要目的是去除生產(chǎn)工藝中所引入的工藝相關(guān)雜質(zhì)和產(chǎn)生的產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)。工藝相關(guān)雜質(zhì)主要包括殘留的修飾用試劑（如還原劑等）、催化劑、反應(yīng)酶、有機(jī)溶劑等；產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)主要為生產(chǎn)過(guò)程中所產(chǎn)生的聚體、片段、以及游離小分子及其衍生物、副反應(yīng)產(chǎn)物等。有些生產(chǎn)工藝還可能通過(guò)純化手段調(diào)整ADC藥物的DAR值和載藥分布。因此，應(yīng)根據(jù)純化的目的選擇純化手段和技術(shù)，并對(duì)生產(chǎn)過(guò)程中可能引入或產(chǎn)生的雜質(zhì)進(jìn)行全面評(píng)估以確定純化效果。
4. ADC制劑
ADC產(chǎn)品劑型和處方的選擇，需根據(jù) ADC產(chǎn)品的復(fù)雜性和特殊性進(jìn)行劑型和處方的開(kāi)發(fā)。由于 ADC 在溶液儲(chǔ)存條件下容易發(fā)生降解、聚集等，應(yīng)開(kāi)展充分的研究選擇合適的劑型。目前一般選擇凍干制劑，為提高臨床用藥的便利性和安全性，基于對(duì)裸抗、小分子穩(wěn)定性的不斷研究與優(yōu)化，開(kāi)發(fā)ADC液體劑型也是ADC制劑的研究方向。
ADC 處方開(kāi)發(fā)應(yīng)基于對(duì)裸抗、有效載荷、連接子和ADC 的理化性質(zhì)的深入理解，科學(xué)設(shè)計(jì)處方開(kāi)發(fā)策略，采用合適的方法（如設(shè)計(jì)空間等），兼顧考慮裸抗、小分子的穩(wěn)定性，確定合適的制劑處方，以保持 ADC 原液和制劑的穩(wěn)定。例如疏水性的小分子藥物與親水性的抗體偶聯(lián)可能會(huì)引起 ADC 的聚集或其他物理化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，因此ADC 產(chǎn)品通常需要選擇合適的表面活性劑的類(lèi)型和濃度，來(lái)減少因不均一性以及疏水性帶來(lái)的聚集、降解等風(fēng)險(xiǎn)。
基于制劑的處方開(kāi)發(fā)確定輔料的種類(lèi)、用量和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。輔料需符合《中國(guó)藥典》通則“生物制品生產(chǎn)用原材料及輔料的質(zhì)量控制”的相關(guān)要求。若使用新型輔料，應(yīng)提交全面的研究資料，在缺乏人體安全性研究數(shù)據(jù)支持的情況下，需參照《新藥用輔料非臨床安全性評(píng)價(jià)指導(dǎo)原則》進(jìn)行研究。
ADC 制劑生產(chǎn)工藝一般包括原液解凍、除菌過(guò)濾、無(wú)菌灌裝、凍干（如適用）等步驟。根據(jù)研究情況確定生產(chǎn)規(guī)模和批量，明確批次的定義，關(guān)注上下游規(guī)模的匹配性等。由于 ADC 產(chǎn)品的異質(zhì)性高、工藝復(fù)雜，生產(chǎn)過(guò)程中應(yīng)盡量避免混批操作。如果制劑工藝過(guò)程涉及凍干工藝，還應(yīng)對(duì)凍干工藝參數(shù)進(jìn)行研究。
5. 工藝優(yōu)化
工藝開(kāi)發(fā)期間隨著工藝步驟和參數(shù)的不斷優(yōu)化、規(guī)模放大、提高產(chǎn)品質(zhì)量和穩(wěn)定性等進(jìn)行生產(chǎn)工藝變更，變更的實(shí)施應(yīng)基于充分的可比性研究?？杀刃匝芯靠蓞⒖?ICH Q5E等相關(guān)指導(dǎo)原則的要求，基于變更的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果建立可比性研究方案或橋接計(jì)劃。在生產(chǎn)工藝放大和轉(zhuǎn)移過(guò)程中，需充分評(píng)估工藝放大和轉(zhuǎn)移對(duì)產(chǎn)品關(guān)鍵質(zhì)量屬性的影響，根據(jù)藥物開(kāi)發(fā)的階段，參考相關(guān)指導(dǎo)原則開(kāi)展基于風(fēng)險(xiǎn)的可比性研究。對(duì)于 ADC 原液生產(chǎn)工藝放大和轉(zhuǎn)移過(guò)程，需特別關(guān)注放大和轉(zhuǎn)移前后關(guān)鍵質(zhì)量屬性如載藥分布、DAR 值和偶聯(lián)位點(diǎn)的可比性，雜質(zhì)的去除能力、生物學(xué)活性等。早期開(kāi)發(fā)階段，由于生產(chǎn)工藝還在開(kāi)發(fā)和優(yōu)化，且相關(guān)知識(shí)、經(jīng)驗(yàn)和批次數(shù)量有限，可基于有限批次的研究數(shù)據(jù)進(jìn)行可比性研究，但應(yīng)關(guān)注安全性和有效性相關(guān)的質(zhì)量屬性（如雜質(zhì)特征、DAR 值、生物學(xué)活性等）。后期開(kāi)發(fā)階段，隨著生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)的積累和對(duì)產(chǎn)品工藝、質(zhì)量的深入理解，應(yīng)開(kāi)展全面和充分的可比性研究，設(shè)定有足夠生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)和臨床數(shù)據(jù)支持的可接受標(biāo)準(zhǔn)。
ADC 產(chǎn)品生產(chǎn)工藝和供應(yīng)鏈的復(fù)雜性對(duì)評(píng)估變更的潛在影響提出了新的挑戰(zhàn)。裸抗、小分子的可比性評(píng)估還需考慮是否需要對(duì) ADC原液/制劑進(jìn)行可比性研究或生產(chǎn)規(guī)模的工藝確認(rèn)，并關(guān)注裸抗、小分子變更產(chǎn)生的質(zhì)量屬性的差異是否會(huì)對(duì)后續(xù)偶聯(lián)工藝或 ADC 關(guān)鍵質(zhì)量屬性產(chǎn)生不良影響。
（二）生產(chǎn)工藝的確認(rèn)與驗(yàn)證
工藝開(kāi)發(fā)過(guò)程中，根據(jù)階段性研究目的不同，需開(kāi)展與階段相適應(yīng)的生產(chǎn)工藝確認(rèn)或驗(yàn)證研究。工藝驗(yàn)證的目的是證明已經(jīng)確定的生產(chǎn)工藝能夠按照擬定的工藝條件持續(xù)穩(wěn)定生產(chǎn)出符合預(yù)期標(biāo)準(zhǔn)的產(chǎn)品。通過(guò)工藝表征識(shí)別每個(gè)工藝參數(shù)對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量或工藝性能表現(xiàn)的影響關(guān)系，制定工藝控制策略，確保工藝的穩(wěn)健性。商業(yè)化生產(chǎn)工藝確定后，應(yīng)在上市前采用至少3批代表性的商業(yè)化生產(chǎn)工藝進(jìn)行規(guī)范的工藝驗(yàn)證。ADC 產(chǎn)品的工藝驗(yàn)證應(yīng)包括裸抗、小分子以及 ADC 原液和制劑的工藝驗(yàn)證。上市后，應(yīng)在商業(yè)化生產(chǎn)過(guò)程中開(kāi)展持續(xù)的工藝確認(rèn)。
裸抗、小分子的工藝驗(yàn)證可參考《中國(guó)藥典》及國(guó)內(nèi)外相關(guān)指導(dǎo)原則的要求開(kāi)展，關(guān)注工藝的穩(wěn)健性和產(chǎn)品質(zhì)量屬性批間一致性等。
ADC 原液和制劑的工藝驗(yàn)證是在充分理解生產(chǎn)工藝與關(guān)鍵質(zhì)量屬性關(guān)系的基礎(chǔ)上，確定生產(chǎn)工藝的關(guān)鍵工藝參數(shù)和控制策略，采用代表性商業(yè)化生產(chǎn)工藝開(kāi)展規(guī)范的工藝驗(yàn)證。驗(yàn)證內(nèi)容應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估確定，一般包括工藝的一致性、工藝參數(shù)的穩(wěn)定性、產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)和工藝相關(guān)雜質(zhì)的去除、產(chǎn)品質(zhì)量屬性批間一致性等。
此外，驗(yàn)證研究可能還包括（但不限于）無(wú)菌工藝驗(yàn)證、除菌過(guò)濾驗(yàn)證、填料和膜包的使用壽命研究、運(yùn)輸驗(yàn)證、清潔驗(yàn)證、設(shè)施和設(shè)備驗(yàn)證等，生產(chǎn)過(guò)程中若存在中間產(chǎn)物的暫存，還應(yīng)對(duì)中間產(chǎn)物的暫存條件和時(shí)限進(jìn)行研究。
由于 ADC 分子的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，在開(kāi)展確認(rèn)和驗(yàn)證時(shí)需同時(shí)考察采用不同批次的裸抗和小分子進(jìn)行偶聯(lián)的策略。此外，根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)，還需重點(diǎn)關(guān)注小分子相關(guān)雜質(zhì)的去除效果和殘留限度。
七、 質(zhì)量研究與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
（一）質(zhì)量研究
質(zhì)量研究需選擇代表性批次（如非臨床研究批次、臨床研究批次和/或商業(yè)化工藝批次等）和/或適當(dāng)生產(chǎn)階段的樣品作為研究對(duì)象，采用先進(jìn)的分析方法進(jìn)行研究，研究項(xiàng)目需全面、充分，盡可能涵蓋所有可能與產(chǎn)品安全性、有效性相關(guān)的項(xiàng)目。分析方法還應(yīng)關(guān)注樣品的處理和分析過(guò)程，避免樣品預(yù)處理等分析過(guò)程對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響，導(dǎo)致分析結(jié)果無(wú)法代表樣品的實(shí)際質(zhì)量。 ADC 產(chǎn)品質(zhì)量研究包括小分子部分、裸抗部分和 ADC原液/制劑部分，原液和制劑之間若存在質(zhì)量特性的差異，應(yīng)分別取樣進(jìn)行研究。
1. 小分子部分
小分子的質(zhì)量研究可參考化學(xué)藥物相關(guān)指導(dǎo)原則開(kāi)展，如《化學(xué)藥物原料藥制備和結(jié)構(gòu)確證研究技術(shù)指導(dǎo)原則》、《化學(xué)藥物雜質(zhì)研究技術(shù)指導(dǎo)原則》、《化學(xué)藥物殘留溶劑研究技術(shù)指導(dǎo)原則》、《化學(xué)藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立的規(guī)范化過(guò)程技術(shù)指導(dǎo)原則》、《手性藥物質(zhì)量控制研究技術(shù)指導(dǎo)原則》以及ICH等相關(guān)指導(dǎo)原則。
除常規(guī)的雜質(zhì)分析外，還應(yīng)結(jié)合雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)等研究分析對(duì)后續(xù)工藝和終產(chǎn)品質(zhì)量的影響?；陔s質(zhì)的類(lèi)型、結(jié)構(gòu)等特點(diǎn)，結(jié)合去向（雜質(zhì)是否參與偶聯(lián)反應(yīng)）研究和清除（雜質(zhì)是否通過(guò)后續(xù)工藝被去除）研究等綜合評(píng)估風(fēng)險(xiǎn)，制定合理的雜質(zhì)控制策略。由于在偶聯(lián)反應(yīng)完成后，可偶聯(lián)雜質(zhì)極難量化且難以去除 ，需重點(diǎn)關(guān)注可偶聯(lián)雜質(zhì)的風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)制定嚴(yán)格的控制標(biāo)準(zhǔn)，并提供合理的依據(jù)。不可偶聯(lián)雜質(zhì)可根據(jù)后續(xù)工藝清除能力等建立合理的控制策略，提供充足的研究數(shù)據(jù)。
2. 裸抗部分
裸抗質(zhì)量研究可參考《中國(guó)藥典》及相關(guān)指導(dǎo)原則，如《人用單克隆抗體質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則》、ICH等。原則上，裸抗的質(zhì)量研究要求和抗體藥物的要求基本一致，此外，還需對(duì)可能影響偶聯(lián)工藝的質(zhì)量屬性，如抗體的氧化水平等，進(jìn)行充分的研究和適當(dāng)?shù)目刂?。?duì)于通過(guò)基因工程技術(shù)在抗體特定位點(diǎn)引入半胱氨酸或包含活性反應(yīng)基團(tuán)的非天然氨基酸進(jìn)行抗體修飾的，需對(duì)修飾位點(diǎn)進(jìn)行確證。雖然抗體依賴(lài)的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用(Antibody-Dependent Cellular Cytotoxicity，ADCC)、補(bǔ)體依賴(lài)的細(xì)胞毒性作用(Complement Dependent Cytotoxicity，CDC)或抗體依 賴(lài) 的 細(xì) 胞 吞 噬 作 用 (Antibody Dependent Cellular Phagocytosis，ADCP)一般不是 ADC產(chǎn)品的主要作用機(jī)理，
但可能也有一定的作用效力，應(yīng)基于抗體的類(lèi)型、結(jié)構(gòu)改造等開(kāi)展 Fc 功能研究，若對(duì)終產(chǎn)品的安全性或有效性產(chǎn)生影響，則應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)目刂啤?/p>
3. ADC原液/制劑
ADC 產(chǎn)品綜合了抗體藥物的靶向性和小分子藥物的強(qiáng)效作用（如細(xì)胞毒性等）的優(yōu)勢(shì)，但二者的偶聯(lián)也改變了彼此的物理化學(xué)特性，可能會(huì)引起藥物分子結(jié)構(gòu)、電荷等變化。因此，ADC 產(chǎn)品除了需要關(guān)注大分子蛋白的質(zhì)量屬性和小分子相關(guān)的質(zhì)量屬性外，還需要增加偶聯(lián)引起的關(guān)鍵質(zhì)量屬性，如 DAR、載藥分布、偶聯(lián)位點(diǎn)（包括非目標(biāo)偶聯(lián)位點(diǎn)）、未偶聯(lián)的裸抗、游離小分子及其衍生物（如降解產(chǎn)物和/或與淬滅劑的反應(yīng)產(chǎn)物）、異質(zhì)性等的研究和控制。應(yīng)采用適宜的、先進(jìn)的分析技術(shù)，從結(jié)構(gòu)確證、理化性質(zhì)、生物學(xué)活性和雜質(zhì)研究等角度進(jìn)行全面的表征，并結(jié)合對(duì)裸抗的特性分析充分了解偶聯(lián)前后的相關(guān)特性變化（如高級(jí)結(jié)構(gòu)、翻譯后修飾、分子大小變異體、電荷變異體、抗原結(jié)合活性、Fc 功能活性等），提供盡可能詳盡的信息以反映終產(chǎn)品的質(zhì)量屬性。質(zhì)量研究應(yīng)至少包括以下范疇：
3.1 結(jié)構(gòu)確證與理化特性
結(jié)構(gòu)確證研究應(yīng)結(jié)合 ADC 產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，采用適宜的分析方法對(duì)一級(jí)結(jié)構(gòu)、二級(jí)結(jié)構(gòu)、高級(jí)結(jié)構(gòu)、偶聯(lián)位點(diǎn)及各位點(diǎn)偶聯(lián)比例等進(jìn)行表征。此外，開(kāi)展 ADC 結(jié)構(gòu)確證時(shí)需結(jié)合偶聯(lián)反應(yīng)的機(jī)理，采用適宜的分析方法，如肽圖譜法和質(zhì)譜分析法等，評(píng)估偶聯(lián)工藝對(duì)裸抗的結(jié)構(gòu)（如氨基酸序列覆蓋率完整性、二硫鍵連接、熱穩(wěn)定性等）、糖基化修飾和其他翻譯后修飾等的影響，尤其需關(guān)注包括互補(bǔ)決定區(qū)在內(nèi)的影響產(chǎn)品功能的關(guān)鍵位點(diǎn)。
鑒于 ADC 分子結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性，基于產(chǎn)品特點(diǎn)可采用酶解、還原等方式結(jié)合液質(zhì)聯(lián)用或串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）技術(shù)分步驟、分段降低 ADC 分子結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性，以提高分析方法的分辨率和結(jié)果的可靠性。對(duì)于修飾發(fā)生在半胱氨酸殘基上或工藝過(guò)程中使用了還原劑的產(chǎn)品，還應(yīng)考慮二硫鍵、三硫鍵、游離巰基和巰基氧化等情況。 抗體通常具有復(fù)雜的異質(zhì)性（如電荷變異體、分子大小變異體、糖基化和其他翻譯后修飾等），裸抗本身的異質(zhì)性及偶聯(lián)造成的異質(zhì)性的疊加會(huì)導(dǎo)致 ADC 的復(fù)雜程度大幅增加。對(duì)于具有高度異質(zhì)性的 ADC 產(chǎn)品（即使是利用定點(diǎn)偶聯(lián)技術(shù)的產(chǎn)品），需采用具有足夠分辨率的可靠分析方法進(jìn)行全面表征，以闡明產(chǎn)品相關(guān)物質(zhì)的多樣性。研究中需根據(jù)有效載荷和連接子的化學(xué)性質(zhì)、偶聯(lián)方式以及產(chǎn)品的異質(zhì)性等選擇合適的特性分析方法。
3.1.1 一級(jí)結(jié)構(gòu)和藥物偶聯(lián)位點(diǎn)
采用適當(dāng)?shù)姆治龇椒?，如肽圖譜法和質(zhì)譜分析法，評(píng)估偶聯(lián)工藝對(duì)抗體一級(jí)結(jié)構(gòu)、糖基化修飾和其他翻譯后修飾等的影響。偶聯(lián)位點(diǎn)可能影響 PK/PD 和分子穩(wěn)定性，可通過(guò)酶解后采用LC-MS法對(duì)偶聯(lián)位點(diǎn)進(jìn)行鑒定和分析。
3.1.2高級(jí)結(jié)構(gòu)
高級(jí)結(jié)構(gòu)是抗體類(lèi)藥物結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、發(fā)揮作用的基礎(chǔ)。
高級(jí)結(jié)構(gòu)表征方法一般包括圓二色譜（CD）、傅里葉變換紅外光譜（FTIR）、熒光光譜、差示掃描量熱法（DSC）、分析型超速離心（AUC）等。相對(duì)于常規(guī)抗體，ADC 的高級(jí)結(jié)構(gòu)分析可能會(huì)因?yàn)榕悸?lián)了化學(xué)藥物而變得更加復(fù)雜。如偶聯(lián)的有效載荷可能產(chǎn)生紅外、紫外或熒光響應(yīng)，則可能影響結(jié)果分析。偶聯(lián)前后的高級(jí)結(jié)構(gòu)若存在差異，在利用生物物理手段對(duì)比結(jié)構(gòu)差異的同時(shí)，需重點(diǎn)關(guān)注差異對(duì)生物學(xué)活性的影響。
3.1.3 DAR值
DAR 值表示每個(gè)抗體分子上偶聯(lián)的有效載荷的平均數(shù)量，直接與產(chǎn)品的有效性和安全性相關(guān)，是 ADC 產(chǎn)品的關(guān)鍵質(zhì)量屬性。根據(jù)連接子和有效載荷的化學(xué)性質(zhì)、偶聯(lián)方式以及 DAR 異質(zhì)性高低選擇適宜的分析手段，常用的方法包括紫外-可見(jiàn)分光光度法（UV）、疏水高效液相色譜法（HIC-HPLC）、反相高效液相色譜法（RP-HPLC）、MS等。其中，小分子的疏水性和吸光度貢獻(xiàn)可能會(huì)干擾 DAR值的測(cè)定，在結(jié)果分析時(shí)應(yīng)考慮。對(duì)于雙載荷 ADC 產(chǎn)品，除了總的 DAR 值以外，還應(yīng)對(duì)兩種載荷的 DAR 值進(jìn)行表征。
3.1.4 藥物載量分布
ADC產(chǎn)品，尤其是采用非定點(diǎn)偶聯(lián)方式的 ADC產(chǎn)品，通常是包含了不同位點(diǎn)偶聯(lián)和連接不同數(shù)量有效載荷的ADC 分子混合物。藥物載藥量分布表示偶聯(lián)有不同數(shù)量的有效載荷的 ADC 分子分別占總的藥物分子的比例。應(yīng)采用適當(dāng)方法，如 HIC-HPLC、RP-HPLC、毛細(xì)管電泳（CE）或MS等，鑒定不同載藥量組分的分布。
3.1.5 分子大小變異體
分子大小變異體直接影響產(chǎn)品的有效性和安全性，與抗體藥物相比，由于偶聯(lián)了小分子可能引起 ADC 藥物疏水性增加、表面電荷分布改變以及熱穩(wěn)定性降低，導(dǎo)致 ADC產(chǎn)品有更強(qiáng)的聚集傾向。應(yīng)采用適宜的方法，如分子排阻色譜法（SEC-HPLC)、十二烷基磺酸鈉-毛細(xì)管電泳（CE-SDS）、分子排阻-多角度靜態(tài)光散射（SEC-MALS）、AUC、動(dòng)態(tài)光散射（DLS）、粒子測(cè)量和 LC-MS 等多種方法對(duì) ADC的分子大小變異體進(jìn)行研究。目前 SEC-HPLC和CE-SDS 是比較常用的放行檢測(cè)方法。SEC 對(duì)聚集體分辨率較好，而 CE-SDS法對(duì)片段分辨率較好，兩種方法有一定的互補(bǔ)性?？苫诋a(chǎn)品結(jié)構(gòu)特點(diǎn)等采用多種分析方法對(duì)分子大小變異體進(jìn)行充分表征。
3.1.6 電荷變異體
常規(guī)抗體藥物通常采用毛細(xì)管區(qū)帶電泳（CZE）、離子交換色譜（IEX-HPLC）、毛細(xì)管等電聚焦電泳（CIEF）或全柱成像毛細(xì)管等電聚焦電泳（iCIEF）等方法研究電荷變異體。對(duì)于 ADC 產(chǎn)品，電荷變異體分析方法的開(kāi)發(fā)需要結(jié)合產(chǎn)品特性，如小分子的特性（尤其是電荷）以及偶聯(lián)位點(diǎn)的選擇（如賴(lài)氨酸、鏈間巰基、半胱氨酸等）等，考慮小分子可能與分離介質(zhì)產(chǎn)生非特異性的相互作用等情況，選擇適宜的一種或多種方法進(jìn)行分析。此外，偶聯(lián)過(guò)程可能會(huì)消耗裸抗上的電荷（如賴(lài)氨酸偶聯(lián)）或有效載荷-連接子引入電荷基團(tuán)，部分小分子存在結(jié)構(gòu)特殊性（如疏水性強(qiáng)、不同結(jié)構(gòu)間動(dòng)態(tài)轉(zhuǎn)化等），導(dǎo)致單一的分析方法可能無(wú)法全面地反映電荷異質(zhì)性。應(yīng)在充分理解分析方法深層原理的基礎(chǔ)上，科學(xué)解讀分析結(jié)果，必要時(shí)可采用其他分析方法進(jìn)行補(bǔ)充分析，如采用肽圖譜法分析樣品不同的離子交換收集組分，間接評(píng)估偶聯(lián)對(duì)抗體本身電荷異質(zhì)性的影響等。對(duì)于雙載荷的 ADC 產(chǎn)品，電荷異質(zhì)性的復(fù)雜程度和檢測(cè)難度可能更高，可采用 iCIEF或其他分析方法監(jiān)測(cè)電荷異質(zhì)性的批間一致性。
3.2生物學(xué)活性
生物學(xué)活性是反映產(chǎn)品質(zhì)量和臨床有效性的重要指標(biāo)?？苫诋a(chǎn)品特點(diǎn)和作用機(jī)制等，建立可反映體內(nèi)藥效機(jī)制的生物學(xué)活性分析方法，用于產(chǎn)品的功能活性研究。ADC產(chǎn)品的主要作用機(jī)制是通過(guò)裸抗與靶抗原結(jié)合，在靶細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外釋放有效載荷并發(fā)揮其生物學(xué)活性功能。應(yīng)采用適當(dāng)?shù)姆治龇椒ǎㄈ?ELISA、表面等離子體共振法或生物層干涉法等）評(píng)估與目標(biāo)抗原的結(jié)合活性。選擇合適的表達(dá)目標(biāo)抗原的細(xì)胞株開(kāi)發(fā)基于細(xì)胞的生物學(xué)活性方法。生物學(xué)活性應(yīng)能體現(xiàn)ADC 的特異性殺傷活性。若Fc介導(dǎo)的效應(yīng)子功能（ADCC, CDC, ADCP等）可能影響藥物的有效性，或表現(xiàn)出效應(yīng)子結(jié)合功能相關(guān)的非特異性毒性，則應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)的生物學(xué)活性評(píng)估。
3.3 雜質(zhì)分析
3.3.1 產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)
產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)是指生產(chǎn)或儲(chǔ)存過(guò)程中產(chǎn)生的非預(yù)期產(chǎn)物。ADC 產(chǎn)品潛在的產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)一般包括聚集體、片段、二硫鍵錯(cuò)配變異體（如適用）、未偶聯(lián)裸抗、雜質(zhì)偶聯(lián)ADC（如適用）、游離小分子及其衍生物（來(lái)源可能是工藝添加或降解產(chǎn)物）、副反應(yīng)產(chǎn)物等。為控制產(chǎn)品質(zhì)量，建議采用適宜的方法對(duì)各類(lèi)產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)進(jìn)行分離和/或鑒定，參考 ICH Q6B 的理念評(píng)估其安全性風(fēng)險(xiǎn)，根據(jù)評(píng)估結(jié)果綜合考慮雜質(zhì)的控制策略。
未偶聯(lián)裸抗與 ADC 終產(chǎn)品競(jìng)爭(zhēng)靶細(xì)胞結(jié)合并最終減少輸送到靶細(xì)胞的藥物量，可能直接影響產(chǎn)品的有效性，且未偶聯(lián)裸抗含量的變化可能會(huì)導(dǎo)致療效發(fā)生變化。在放行檢測(cè)和穩(wěn)定性研究中，應(yīng)依據(jù)偶聯(lián)的有效載荷的性質(zhì)（如電荷、疏水性）選擇合適的分析方法對(duì)未偶聯(lián)裸抗的百分含量進(jìn)行監(jiān)測(cè)。
3.3.2 工藝相關(guān)雜質(zhì)
工藝相關(guān)雜質(zhì)是指生產(chǎn)過(guò)程中引入的雜質(zhì)，應(yīng)結(jié)合生產(chǎn)用原材料、生產(chǎn)工藝等鑒定潛在的工藝相關(guān)雜質(zhì)并根據(jù)情況進(jìn)行定性和/或定量研究，評(píng)估雜質(zhì)殘留的安全性風(fēng)險(xiǎn)，必要時(shí)將具有潛在安全性風(fēng)險(xiǎn)的雜質(zhì)殘留納入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行控制?？赡馨ㄓ袡C(jī)溶劑、生物酶（如適用）、元素雜質(zhì)、偶聯(lián)試劑、亞硝胺（如適用）等。
3.3.3 污染物
污染物系指生產(chǎn)過(guò)程中引入的顆粒物、微生物或其相關(guān)組分（如細(xì)菌內(nèi)毒素等）。生產(chǎn)過(guò)程中需采取措施避免引入污染物并對(duì)其進(jìn)行相應(yīng)的控制，同時(shí)在原液和制劑的放行檢測(cè)和穩(wěn)定性研究中對(duì)必要的指標(biāo)進(jìn)行相應(yīng)的監(jiān)測(cè)。
3.4 含量
采用適宜的物理、化學(xué)或免疫學(xué)方法測(cè)定含量。如采用分光光度法在 280 nm 處測(cè)定，還應(yīng)考察小分子、緩沖液組分等對(duì) 280 nm 處吸光度測(cè)量值的潛在貢獻(xiàn)，如發(fā)現(xiàn)明顯干擾，在供試品濃度計(jì)算中應(yīng)納入適當(dāng)?shù)男Ｕ蜃踊蛞肫渌糠椒ā?/p>
3.5 其他特性
其他特性分析需結(jié)合產(chǎn)品類(lèi)型及劑型進(jìn)行控制，可能包括性狀、可見(jiàn)異物、異常毒性（如適用）、不溶性微粒、pH 值、滲透壓摩爾濃度、裝量、復(fù)溶時(shí)間（如適用）、水分（如適用）、輔料含量等。
（二）質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)作為產(chǎn)品質(zhì)量控制的重要組成部分，一般基于產(chǎn)品特點(diǎn)和質(zhì)量研究而確定。鑒于 ADC 產(chǎn)品復(fù)雜的結(jié)構(gòu)和特殊的質(zhì)量屬性，質(zhì)量控制策略應(yīng)基于對(duì)裸抗和小分子的開(kāi)發(fā)經(jīng)驗(yàn)、質(zhì)量研究、對(duì)終產(chǎn)品關(guān)鍵質(zhì)量屬性的理解以及對(duì)工藝認(rèn)識(shí)的不斷積累，結(jié)合非臨床和臨床數(shù)據(jù)，通過(guò)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估手段綜合制定。 裸抗、小分子部分的控制策略與單獨(dú)作為抗體藥物或化學(xué)原料藥的常規(guī)控制策略基本一致，不再贅述。
1. 檢驗(yàn)項(xiàng)目
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的檢驗(yàn)項(xiàng)目通常是在充分的質(zhì)量研究基礎(chǔ)上確定的，在保證產(chǎn)品安全有效方面有重要影響的質(zhì)量屬性。ADC 原液和制劑一般包括性狀（如外觀、顏色）、鑒別、DAR 值和藥物載量分布、純度和雜質(zhì)、生物學(xué)活性、含量、一般檢項(xiàng)等，特殊劑型需根據(jù)劑型特點(diǎn)增加額外的檢項(xiàng)。具體檢驗(yàn)項(xiàng)目還應(yīng)基于產(chǎn)品類(lèi)型、生產(chǎn)工藝、穩(wěn)定性和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估等確定。
2. 標(biāo)準(zhǔn)限度
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)限度通?；诎踩院陀行缘目紤]，其制定應(yīng)有合理的依據(jù)，一般需考慮產(chǎn)品特點(diǎn)、非臨床和臨床試驗(yàn)暴露情況、各個(gè)階段研究用批次數(shù)據(jù)、批間一致性研究數(shù)據(jù)、穩(wěn)定性研究等，還應(yīng)考慮所使用的分析方法的靈敏度和變異度等。
3. 分析方法
分析方法的開(kāi)發(fā)和驗(yàn)證應(yīng)遵循藥品開(kāi)發(fā)的一般方法學(xué)規(guī)律，隨著經(jīng)驗(yàn)積累和研究的不斷深入逐步優(yōu)化完善并驗(yàn)證，以適應(yīng)各階段的質(zhì)量控制要求?；诰唧w產(chǎn)品建立的新方法應(yīng)進(jìn)行全面的驗(yàn)證；藥典方法應(yīng)進(jìn)行適用性確認(rèn)；若采用經(jīng)修改的藥典方法或藥典替代方法，應(yīng)進(jìn)行對(duì)比研究確認(rèn)其合理性。基于不同研發(fā)階段產(chǎn)品質(zhì)量控制和對(duì)比研究的需要，臨床試驗(yàn)開(kāi)展前應(yīng)完成安全性和生物學(xué)活性相關(guān)檢項(xiàng)的分析方法的確認(rèn)研究。上市申請(qǐng)前應(yīng)完成全面的方法學(xué)驗(yàn)證，建議盡量在確證性臨床試驗(yàn)開(kāi)展前完成方法學(xué)的開(kāi)發(fā)和驗(yàn)證，以確保確證性臨床試驗(yàn)用樣品與商業(yè)化生產(chǎn)產(chǎn)品的質(zhì)量控制保持一致。研發(fā)期間若發(fā)生了方法學(xué)變更或轉(zhuǎn)移，應(yīng)開(kāi)展相應(yīng)的方法學(xué)橋接研究和方法學(xué)確認(rèn)或驗(yàn)證。
4. 標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品的建立和制備可參照《中國(guó)藥典》“生物制品國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制備和標(biāo)定”的相關(guān)要求。建議采用代表性批次樣品建立標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品，根據(jù)用途進(jìn)行活性和含量等標(biāo)定并開(kāi)展相應(yīng)的穩(wěn)定性研究。
八、 穩(wěn)定性研究
穩(wěn)定性研究是貫穿整個(gè)藥品研發(fā)、上市以及上市后質(zhì)量研究的重要內(nèi)容，是產(chǎn)品有效期或復(fù)驗(yàn)期設(shè)定的依據(jù)，為產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝、制劑處方、包裝材料等方面提供依據(jù)，同時(shí)也是產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定的基礎(chǔ)。
穩(wěn)定性研究可參照《生物制品穩(wěn)定性研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》和 ICH Q5C、ICH Q1A 等指導(dǎo)原則的相關(guān)要求開(kāi)展，并應(yīng)符合《中國(guó)藥典》中“生物制品貯藏和運(yùn)輸規(guī)程”相關(guān)規(guī)定的要求。ADC 產(chǎn)品的穩(wěn)定性研究對(duì)象一般包括裸抗、小分子、ADC原液和 ADC制劑，研究方案應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品自身的特點(diǎn)、生產(chǎn)工藝、臨床用藥方案等情況設(shè)計(jì)，一般包括長(zhǎng)期試驗(yàn)、加速試驗(yàn)、影響因素試驗(yàn)、運(yùn)輸穩(wěn)定性試驗(yàn)和使用中穩(wěn)定性試驗(yàn)等，研究條件應(yīng)充分考慮生產(chǎn)、貯存、運(yùn)輸和使用中可能遇到的情況?？疾祉?xiàng)目應(yīng)全面、合理，根據(jù)產(chǎn)品劑型的特點(diǎn)，選擇對(duì)產(chǎn)品的安全性、有效性等有重要指示意義的項(xiàng)目，檢測(cè)方法應(yīng)具備指示能力，能夠充分檢測(cè)出產(chǎn)品質(zhì)量的變化特征。
有效載荷和連接子通常具有活性較高的基團(tuán)，除長(zhǎng)期和加速穩(wěn)定性研究外，還應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)開(kāi)展高溫、高濕、光照、氧化等條件下的穩(wěn)定性研究，關(guān)注小分子在生產(chǎn)、運(yùn)輸以及貯藏中的穩(wěn)定性。
ADC 原液和制劑由于分子結(jié)構(gòu)的特殊性和復(fù)雜性，其蛋白不穩(wěn)定性風(fēng)險(xiǎn)較高，因此在穩(wěn)定性研究過(guò)程中應(yīng)密切關(guān)注制劑中蛋白的聚集和顆粒形成、有效載荷脫落以及輸液袋等容器對(duì)藥物的吸附。
九、 包裝及容器密封系統(tǒng)
包裝及容器密封系統(tǒng)一般包括用于儲(chǔ)存裸抗、小分子、ADC 原液和制劑的包裝容器。ADC 產(chǎn)品的疏水性可能會(huì)導(dǎo)致對(duì)密封容器的非特異性粘附，應(yīng)基于產(chǎn)品特性選擇合適的包裝容器。為避免儲(chǔ)存容器或密封系統(tǒng)對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)量產(chǎn)生非預(yù)期影響，可參考國(guó)內(nèi)外相關(guān)指導(dǎo)原則對(duì)容器和密封系統(tǒng)開(kāi)展相容性研究，并對(duì)密封系統(tǒng)開(kāi)展密封性研究。對(duì)于具有特殊功能的包裝材料（如遮光材料），應(yīng)對(duì)其功能進(jìn)行研究和驗(yàn)證。
十、 名詞解釋
裸抗：靶向特異性抗原的抗體或抗體片段，如單克隆抗體（包括單抗、雙特異性抗體或多特異性抗體、納米抗體等）、抗體融合蛋白、Fab/ScFv片段等。
有效載荷（payload）：ADC 藥物到達(dá)腫瘤細(xì)胞、腫瘤微環(huán)境或其他靶細(xì)胞后發(fā)揮作用的小分子，目前最常見(jiàn)的是小分子細(xì)胞毒藥物。
小分子：在 ADC 產(chǎn)品中，與裸抗連接的連接子、有效載荷或有效載荷-連接子，如裸抗首先與連接子反應(yīng)后，進(jìn)一步與有效載荷反應(yīng)形成 ADC 原液，則連接子、有效載荷均為小分子。若首先合成有效載荷-連接子復(fù)合物，然后進(jìn)一步與裸抗反應(yīng)獲得 ADC原液，則有效載荷-連接子為小分子。
十一、 參考文獻(xiàn)
